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    EdU細胞增殖檢測試劑盒

    發布時間:2019/8/28 點擊次數:5134 來源:US EVERBRIGHT INC.

    一、細胞增殖直接測定DNA合成常用法

    直接測定DNA合成是細胞增殖檢測的最準確方法之一,常用檢測法有BrdU檢測和新型EdU檢測。


    BrdU

    EdU

    原理

     BrdU為胸腺嘧啶衍生物,可與胸苷競爭摻入DNA,再用抗BrdU單抗,經ICC染色,顯示增殖細胞。

    EdU是一種胸腺嘧啶脫氧核苷類似物,可代替胸苷摻入正在復制的DNA分子中,通過EdU與熒光標記特異性反應快速檢測DNA復制活性。

    檢測分子

    很小,BrdU抗體的1/500

    檢測方式

    免疫反應

    化學反應

    影響其他標記

    DNA變性

    需要

    不需要

    實驗時間

    過夜

    2.5h

    檢測敏感度

    一般

    靈敏

    植物細胞檢測

    需消化細胞壁,細胞壁消化酶常含雜質,甚至破壞細胞形態表征,降低準確性

    無需消化細胞壁即可完成檢測,檢測便捷準確

    優缺點

    破壞了DNA雙鏈結構,影響了其他染料的結合染色,出現染色彌散,準確性降低

    染料易擴散特異性好,不破壞DNA和核的結構,避免樣品損傷,無需抗原抗體反應,可準確反映細胞和組織水平DNA復制活性



    BrdU需DNA變性后才能與抗體結合,導致BrdU、Hoechst染色彌散,邊緣模糊不清;EdU邊緣清晰完整,檢測靈敏準確


    二、EdU檢測原理

    EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine),中文名為5-乙炔基-2' -脫氧尿苷,是一種新型胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷,thymidine)類似物,EdU可以在DNA合成過程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中。EdU上的乙炔基能與熒光標記的小分子疊氮化物探針(如YF488/555/594/647)通過一價銅離子的催化發生共價反應,形成穩定的三唑環,該反應非常迅速,被稱作點擊反應(Click reaction) 。通過點擊反應,新合成的DNA會被相應的熒光探針所標記,運用熒光檢測設備(熒光顯微鏡、流式細胞儀等)檢測到增殖的細胞。




    三、EdU檢測應用

    細胞增殖、細胞分化、生長與發育、DNA修復、病毒復制、細胞標記示蹤、線粒體活性、動物活體注射等方面的研究,尤其適合進行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他藥物的篩選實驗。

    EdU應用

    詳情

    動物活體注射實驗

    EdU適用于各種動物活體注射,穩定無副作用,檢測時間可以從幾小時至數十天,也適用于石蠟或冰凍組織切片檢測,完全滿足動物細胞增殖的檢測,是全面分析組織或器官細胞增殖的理想工具。

    植物成像實驗

    EdU分子小可透過細胞壁,無需DNA變性和抗原抗體反應,可準確檢測植物生長發育分化等性狀的細胞增殖情況,其適用于各種單/雙子葉植物的細胞增殖檢測。

    細胞標記示蹤

    標記示蹤可直觀了解細胞在體內的分布,還可追蹤其體內的分化轉化及調控機制。EdU能競爭性地滲入正在復制的DNA分子,從而達到標記分裂細胞的目的,簡單快速準確示蹤細胞,示蹤標記時間長達6,遠勝于BrdU。

    DNA損傷修復檢測

    代謝活動和環境因素如紫外線等能造成人體細胞DNA分子結構的破壞,進而改變細胞閱讀信息和基因編碼的方式。DNA損傷修復須經常運行,快速改正DNA結構的任何錯誤。EdU可快速有效標記,細胞核的熒光強度跟DNA損傷修復活性成正相關。

    線粒體活性檢測

    線粒體是動物細胞的一種半自主細胞器,具有自身特異的DNA分子。這類環狀雙鏈DNA記載了線粒體的遺傳信息。采用EdU可以同時標記線粒體DNA,結合APH即可實現針對線粒體DNA復制活性的檢測。

    病毒增殖活性檢測

    病毒DNA復制是病毒增殖的一個重要表現,采用EdU方法可快速檢測病毒DNA的復制活性,并掌握病毒增殖的位點。


    四、EdU檢測試劑盒特點

    YF染料標記多種顏色可選擇;熒光亮度高;光穩定性好,適合做顯微鏡檢測

    簡單僅需三步:EdU孵育,細胞固定化,熒光檢測

    快速檢測只需2.5 h,大大縮短實驗周期

    準確標記率高無需變性,更好地保護細胞形態

    兼容允許與多種抗體、熒光蛋白同時標記,可同時檢測細胞其他性狀特征

    靈敏—YF染料易擴散,單個增殖細胞也可準確檢測

    五、實驗圖

    5.1 顯微鏡觀察

      

             YF?594 Click-iT EdU                                       hoechst核復染                                            Overlay

    EdU檢測試劑盒可以很好的將處于增殖狀態的細胞標記出來


    5.2 流式細胞儀

    加羥基脲抑制增殖

    正常細胞增殖

    Hela細胞,10 μM EdU孵育2h。

    YF?594 Click-iT EdU可清楚的分離已結合EdU的增殖細胞與未結合EdU的非增殖細胞

    六、產品目錄

     

    貨號

    產品名稱

    規格

    目錄價(RMB

     

    E6032-2mg

    EdU

    2mg

    2500

     

    E6032-10mg

    10mg

    3800

     

    E6032-50mg

    50mg

    5100

    EdU(細胞成像)

    C6015-100T

    YF?488 Click-iT EdU Imaging Kits(綠色熒光)

    100T

    1100

    C6015-500T

    500T

    2200

    C6015-1000T

    1000T

    3600

    C6016-100T

    YF?555 Click-iT EdU Imaging Kits(橙紅色熒光)

    100T

    1100

    C6016-500T

    500T

    2200

    C6016-1000T

    1000T

    3600

    C6017-100T

    YF?594 Click-iT EdU Imaging Kits(紅色熒光)

    100T

    1100

    C6017-500T

    500T

    2200

    C6017-1000T

    1000T

    3600

    C6018-100T

    YF?647A Click-iT EdU Imaging Kits(遠紅熒光)

    100T

    1100

    C6018-500T

    500T

    2200

    C6018-1000T

    1000T

    3600

    EdU(細胞流式)

    C6019-20T

    YF?488 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits(綠色熒光)

    20T

    1800

    C6019-50T

    50T

    4000

    C6020-20T

    YF?555 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits(橙紅色熒光)

    20T

    1800

    C6020-50T

    50T

    4000

    C6021-20T

    YF?594 Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits(紅色熒光)

    20T

    1800

    C6021-50T

    50T

    4000

    C6022-20T

    YF?647A Click-iT EdU Flow Cytometry Assay Kits(遠紅熒光)

    20T

    1800

    C6022-50T

    50T

    4000



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